Composition du jury
Rapporteurs :
Marie-Christine ANDRY, Professeur, Faculté de Pharmacie, Reims
Odile CHAMBIN, Professeur, Laboratoire de Pharmacie Galénique, Dijon
Examinateurs :
Stéphane Gibaud, MCU,PH, Faculté de Pharmacie, Nancy
Marie Socha, MCU-PH, Faculté de Pharmacie, Nancy
Membres invités :
Alain ASTIER, PU-PH, Chef de Pôle Pharmacie H. Mondor, Créteil
Julien SCALA BERTOLA, MCU-PH, Faculté de Médecine, Nancy
L’oxyde nitrique (NO) est une molécule endogène produite par les cellules endothéliales et de nombreuses autres cellules de l'organisme. Il exerce des fonctions physiologiques variées (vasodilatation, inhibition de la prolifération des cellules musculaires lisses, inhibition de l’agrégation plaquettaire, régulation de la barrière intestinale,…). Les S-nitrosothiols sont des substances pharmacologiquement actives qui ont la capacité de libérer du NO.
L'objectif de cette thèse était de développer de nouveaux « donneurs de NO » stables en liant du S-nitrosoglutathion (GSNO) à une structure polymérique (chitosan ou alginate). Ce nouveau polymère pourrait être utilisé dans le traitement de la maladie de Crohn. Dans une première étape, les polymères ont été liés au glutathion (GSH) : le chitosan-GSH et l'alginate-GSH ont ainsi été préparés par la « méthode des carbodiimides » et dans une deuxième étape, les polymères finaux [SNOC (S-nitrosoglutathione-oligosaccharide-chitosan) et SNA (S-nitrosoglutathione-alginate)] ont été préparés par nitrosation des deux conjugués précédent. La quantité de NO fixée a été déterminée par les méthodes Griess et Saville. L’aptitude des polymères à libérer du NO et à passer la barrière intestinale [SNOC et SNA] a été évaluée dans une chambre de Ussing [température de 37°C avec une pression constante O2].
Nous avons obtenu des polymères avec des quantités variables de NO en fonction de la méthode utilisée (159 µmol de NO/g à 525 µmol de NO/g pour le SNOC ; 174 µmol de NO/g à 468 µmol de NO/g pour le SNA). Dans la chambre d’Ussing, le SNOC était stable pendant au moins 6h et le SNA pendant au moins 10h. Les deux polymères étaient en mesure de transporter une quantité importante de NO d'une manière durable.
Enfin, nous avons essayé de mettre au point des microparticules de S-nitrosoglutathion (GSNO) par spray drying. L’Eudragit ® FS 30D, qui est gastro-résistant, a été choisi comme polymère. La caractérisation de microparticules a été réalisée par microscopie électronique à balayage (SEM), par diffraction X (PXRD), par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourrier (FTIR). Les essais de libération in vitro ont été réalisés dans un tampon phosphate (pH 1,2, 3, 6, 6,8 et 7,4).
Les microparticules étaient chargées négativement avec une taille moyenne allant de 5 à 7 µm. La formulation était stable à pH acide mais a montré une libération rapide à pH basique.
Ces microparticules polymériques sont donc résistantes à l’acide ; elles pourraient donc servir de systèmes de délivrance du NO au niveau intestinal.
Nous pensons que ces différentes formulations pourraient être testées sur des modèles animaux dans le traitement de la maladie de Crohn.
